登革熱IgG間接法檢測試劑-澳洲PANBIO進口

Panbio Dengue IgG Indirect ELISA

產品目錄號 01PE30

預期用途

Panbio Dengue IgG Indirect ELISA 用于定性檢測登革熱病原血清型（1、2、3 和 4）血清中的 IgG 抗體， 輔助臨床實驗室診斷出現臨床癥狀或既往感染登革熱病毒的患者。 

概述

蟲媒病毒中的登革熱屬通過蚊子傳播，主要是埃及伊蚊和白紋伊蚊。登革熱病毒感染，與傷寒病有關，其特征是突然發熱、劇烈頭痛、肌痛、關節痛和皮疹。登革熱感染的嚴重并發癥包括登革出血熱和登革休克綜合征。此類并發癥的發病率增加與繼發性感染不同登革熱血清型有關。

通過ELISA 對四種登革熱血清型的 IgG 類特異性抗體進行檢測，是一種診斷既往感染登革熱病毒的患者的重要方法。 配對血清中 IgG ， 水平不斷升高是活動性登革熱感染的表現。傳統上，血凝抑制試驗（HAI）滴度被用于劃分原發性或繼發性感染。當前的界定方法是采用及時分離至少 7 天的配對血清標本檢測，急性標本的 HAI 滴度≥ 1:2560 被認為患者感染了繼發性黃病毒 ¹。 

檢測原理

血清中存在的登革熱病毒抗體，與微孔測試條上聚苯乙烯表面附著的登革熱抗原結合物相結合。洗去剩余的血清并添加過氧化物酶標記的抗人 IgG 抗體。清洗微孔，再添加無色的底物系統 - 四甲基聯苯胺/過氧化氫（TMB 顯色液）。底物被酶水解后，顯色液變藍。用酸終止反應后，TMB 變黃。顯色表示測試樣本中存在登革熱 IgG 抗體。

提供的材料

1. 登革熱抗原（血清型 1、2、3 和 4）包被微孔板-（12x8 孔）。即用型。未使用的微孔應該立即重新密封并儲存于干燥環境中。有效期內儲存于 2-8℃可保持穩定。

2. 清洗緩沖液（20 倍） - 1 瓶，60mL 20 倍濃縮磷酸鹽緩沖鹽水（pH 7.2 – 7.6），含吐溫 20 和防腐劑

（0.1% Proclin™）。低溫可能結晶。若去除結晶，可在 37℃孵育液體至澄清。混合均勻。用 19 體積的蒸餾水稀釋 1 體積的清洗緩沖液。稀釋后的緩沖液可在 2-25℃儲存一周。

3. 樣本稀釋劑– 2 瓶， 50 mL（粉色）。即用型。Tris 緩沖生理鹽水（pH 7.2 – 7.6），含防腐劑（0.1% Proclin™）和添加劑。有效期內儲存于 2-8℃可保持穩定。

4. HRP 標記抗人 IgG – 1 瓶，15mL（綠色）。即用型。辣根過氧化物酶（HRP）標記山羊抗人 IgG， 含防腐劑（0.1% Proclin™）和蛋白穩定劑。有效期內儲存于 2-8℃可保持穩定。

5. TMB 顯色液（TMB） - 1 瓶，15mL。即用型。3,3’,5,5'-四甲基聯苯胺和過氧化氫的混合物，存放于枸櫞酸鹽緩沖液中（pH 3.5 – 3.8）。有效期內儲存于 2-8℃可保持穩定。

6. 陽性質控品– 1 瓶，紅色瓶蓋，200μL 人血清（含 0.1%疊氮話鈉和 0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內儲存于 2-8℃可保持穩定。

7.  校準品– 1 瓶，黃色瓶蓋，400μL 人血清（含 0.1%疊氮話鈉和 0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內儲存于 2-8℃可保持穩定。

8. 陰性質控品– 1 瓶，綠色瓶蓋，200μL 人血清（含 0.1%疊氮話鈉和 0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內儲存于 2-8℃可保持穩定。

9. 終止液 – 1 瓶，紅色瓶蓋，15mL。即用型。1M 磷酸。有效期內儲存于 2-25℃可保持穩定。 

Proclin™ 300 是 Rohm 和 Haas 公司的注冊商標。

需要但未提供的材料

1. 精確、可調節的微量移液器，含一次性吸液頭（5-1000 μL 容積）

2. 去離子水

3. 標板清洗系統

4. 酶標儀，含 450nm 濾波器

5. 計時器

6. 刻度量筒

7. 燒瓶

8. 試管或微滴定板，用于稀釋血清

 注意事項

用于體外診斷

1. 在制備質控品的過程中使用的所有人源性材料已經過人類免疫缺陷病毒 1/2（HIV 1 /2）抗體、丙肝

（HCV）和乙肝表面抗原的檢測，結果為陰性。但是，任何測試方法都不能*確信，且所有人源性質控品和抗原包被微孔板都應按照潛在傳染性材料處理。疾病控制和預防中心以及美國國立衛生研究院建議將潛在傳染原按照生物安全二級 ² 處理。

2. 該測試只能使用血清執行。尚未建立使用全血、血漿或其它標本基質的方法。

3. 不可使用黃疸或脂血癥血清，以及出現溶血或微生物生長的血清。

4. 不可加熱，否則血清將失去活性。

5. 在開始檢測前所有試劑必須平衡至室溫（20-25℃）。檢測受溫度變化的影響。微孔板在達到室溫

（20-25℃）之前不可從密封袋中取出。

6. 直接用干凈的吸液頭從試劑瓶中吸出試劑。轉移試劑可能導致污染。

7. 未使用的微孔應該立即重新密封并儲存于干燥環境中。否則將產生錯誤結果。

8. 底物系統：

(a) 由于 TMB 易受金屬離子的污染，所以底物系統不能與金屬表面接觸。

(b) 避免長時間陽光直射。

(c) 有些清潔劑可干擾 TMB 的性能。

(d) TMB 可能呈現淡藍色，這不影響底物的活性或測定結果。

1. 某些試劑盒組成包含疊氮話鈉，疊氮話鈉可能與鉛或銅管反應形成極易爆炸的金屬疊氮化合物。通過管道裝置處理這些試劑時，請用大量清水沖洗以避免疊氮化物在排水管內累積。

2. 疊氮話鈉還抑制酶標物的活性。在添加酶標物時必須使用干凈的吸液頭，避免攜帶其它試劑的疊氮話鈉。

3. 根據適用的歐洲共同體（EC）指令，產品組成的危害信息如下：

如需更多安全信息，請參考 STANDARD DIAGNOSTICS, INC.的安全數據表（SDS）。

標本采集和制備

靜脈穿刺獲取的血液應該置于室溫（20-25℃）下直到凝塊形成，再按照臨床實驗室標準化研究院（CLSI） 的《認可標準——診斷用血液標本的靜脈穿刺采集程序，H3》離心。應該盡快分離血清。如果在 2 天內不進行檢測，血清應該 2-8℃冷藏或者低于或等于- 20℃冷凍儲存。不*使用自解凍冷凍機儲存血清。不*使用黃疸血清，以及出現溶血、脂血或微生物生長的血清。CLSI 提供了儲存血液標本的建議，《認可標準——血液標本的處理加工程序，H18》。

檢測程序

注： 確保所有試劑在開始測定前平衡至室溫（20-25℃）。在所給時間和溫度范圍以外進行測試可能產生無效的結果。不在預定時間和溫度范圍內的測試必須進行重復。

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